14-3-3 η Double Nickase Plasmid (h): sc-402892-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das 14-3-3 η Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- 14-3-3 η Double-Nickase-Plasmid (h) und 14-3-3 η Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf YWHAH abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: 14-3-3 η: sc-293464
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
14-3-3 η Double Nickase Plasmid (h) | sc-402892-NIC | 20 µg | $410.00 |
YWHAH kodiert das humane Adapterprotein 14-3-3 η, ein Mitglied einer konservierten Proteinfamilie, die an Phosphoserin-/Phosphothreonin-Motive bindet und so die Lokalisation, Stabilität und Aktivität einer Vielzahl von Zielproteinen reguliert. Über diese Interaktionen integriert 14-3-3 η Signalknoten, die die Progression des Zellzyklus, Apoptose, Stressantworten und die Organisation des Zytoskeletts steuern, mit ausgeprägten Verbindungen zu MAPK/ERK-, PI3K–AKT- und weiteren kinasegetriebenen Signalwegen. Durch die Modulation phosphorylierungsabhängiger Proteinkomplexe trägt YWHAH zur neuronalen Entwicklung und synaptischen Funktion sowie allgemein zur Proteostase und zur Genauigkeit der Signalübertragung bei. Eine Fehlregulation der 14-3-3-Familien-Signalgebung wurde mit neuropsychiatrischen und neurodegenerativen Phänotypen sowie mit veränderten Wachstums- und Überlebensprogrammen in der Krebsbiologie in Verbindung gebracht, wodurch YWHAH ein nützliches Ziel für mechanistische Studien von Signalwegen darstellt.
14-3-3 η Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des YWHAH-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von YWHAH abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die YWHAH-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit YWHAH-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.