Plásmido CRISPR de Activación (h) γ-sarcoglycan: sc-402275-ACT

SGCG codifica la γ-sarcoglicana, un componente central del complejo de sarcoglicanos dentro del complejo de glicoproteínas asociado a la distrofina, que estabiliza la membrana de la célula muscular durante la contracción. La γ-sarcoglicana contribuye al acoplamiento entre el citoesqueleto y la matriz extracelular, apoyando la integridad del sarcolema y la mecanotransducción en el músculo estriado. La alteración de SGCG perturba el ensamblaje del complejo de sarcoglicanos y compromete la estabilidad de la membrana, favoreciendo la señalización asociada al daño, un manejo alterado del calcio y una remodelación sensible al estrés. La disfunción de SGCG está vinculada genéticamente a fenotipos de distrofia muscular, por lo que constituye un objetivo relevante para estudiar la biología del complejo distrofina-glicoproteína y las vías de degeneración muscular.

γ-sarcoglycan El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SGCG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

γ-sarcoglycan El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SGCG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SGCG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de γ-sarcoglycan. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SGCG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de γ-sarcoglycan en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía γ-sarcoglycan en células tumorales con expresión de SGCG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.