Partículas Lentivirales de Activación (h2) γ Enolase: sc-400763-LAC-2

El gen humano ENO2 codifica la γ-enolasa (enolasa específica de neuronas), una enzima glucolítica que cataliza el paso de 2-fosfoglicerato a fosfoenolpiruvato, conectando el metabolismo energético neuronal con flujos más amplios de carbono y con el manejo de lactato/piruvato. La expresión de ENO2 está enriquecida en neuronas y células neuroendocrinas y se utiliza con frecuencia para estudiar el acoplamiento metabólico, los estados de diferenciación celular y las respuestas al estrés que remodelan la glucólisis. Las alteraciones en la abundancia de ENO2 y en la regulación de sus isoformas se han asociado con procesos neurodegenerativos, lesión neuronal y la biología de tumores neuroendocrinos, lo que refleja cambios en la demanda metabólica y en la composición de tipos celulares. La edición génica de ENO2 permite la investigación mecanística del control glucolítico, la identidad de linaje neuronal y la reprogramación metabólica mediante modelos neuronales, organoides cerebrales y sistemas de células neuroendocrinas.

Las partículas de activación lentiviral γ Enolase (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ENO2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral γ Enolase (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ENO2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de γ Enolase. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ENO2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.