γENaC CRISPR 활성화 플라스미드(h): sc-402577-ACT

SCNN1G는 상피 나트륨 채널(ENaC)의 γ 소단위(γENaC)를 암호화하며, 이는 신장, 폐, 결장 및 기타 상피의 첨단막(apical membrane)을 통해 전기생성(electrogenic) 방식의 Na⁺ 유입을 매개하는 아밀로라이드(amiloride) 감수성 이형삼량체 채널입니다. γENaC 기능은 알도스테론과 바소프레신 신호전달과 통합되어 상피를 가로지르는 염 및 수분 수송을 조절하고, 그 결과 세포외액 용적, 기도 표면액(airway surface liquid) 항상성, 그리고 전신 전해질 균형에 영향을 미칩니다. 채널 활성은 단백질분해적 처리(proteolytic processing), NEDD4-2를 통한 유비퀴틴 의존적 수송(trafficking), 그리고 막 체류(membrane residency) 및 개방확률(open probability)을 조절하는 세포 경로에 의해 조절됩니다. SCNN1G를 포함한 ENaC 소단위의 조절 이상은 염 처리 및 기도 수분화 장애와 관련된 질환에 연관되어 있으며, 상피 생리학 및 이온수송 생물학에서의 기전 연구를 뒷받침합니다.

γENaC CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 기본 DNA 서열을 변경하지 않고 내인성 SCNN1G 발현을 상향 조절하는 표적화된 비파괴적 접근법을 제공합니다.

γENaC CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 인간 세포주에서 SCNN1G 유전자좌의 고효율, 위치 특이적 전사 상향 조절을 위해 설계된 3개의 플라스미드로 구성된 시너지 활성화 매개체(SAM) 시스템입니다. 이 시스템은 DNA 결합 능력은 유지하면서 뉴클레아제 활성을 제거하는 두 가지 비활성화 돌연변이(D10A 및 N863A)를 지닌 촉매 활성 없는 Cas9(dCas9)을 중심으로 구축되었습니다. 이 dCas9은 강력한 전사 활성화제인 VP64와 융합되어 있으며, 선별을 위해 블라스티시딘 내성 유전자와 함께 발현됩니다. 두 번째 플라스미드는 dCas9-VP64와 협동하여 작용하는 2차 활성화 복합체인 MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 암호화하며, 히그로마이신 내성 유전자와 함께 존재한다. 세 번째 플라스미드는 표적 특이적 20nt sgRNA를 암호화하며, 이는 MS2-p65-HSF1 복합체를 활성화 부위로 유인하는 두 개의 MS2 RNA 아파타머와 융합되어 있으며, 푸로마이신 내성 유전자가 함께 포함되어 있습니다. 세 플라스미드는 모든 시스템 구성 요소의 균형 잡힌 발현을 위해 질량비 1:1:1로 전달됩니다.

표적 부위에 조립되면 SAM 복합체는 SCNN1G 전사 시작점의 상류 약 200bp 지점에 결합하며, 이곳에서 VP64, p65 및 HSF1이 협력하여 전사 기구를 모집하고 내인성 γENaC 발현의 상향 조절을 유도합니다. 핵산분해 활성을 가진 Cas9과 달리, dCas9은 이중 가닥 절단을 유발하거나 게놈 서열을 변형시키지 않아, 원형 SCNN1G 위치를 보존하고 내인성 위치에서 γENaC 의존적 전사 반응을 연구할 수 있게 하여, 기능 연구, 표적 유전자 식별 및 SCNN1G 발현이 침묵되거나 감소된 종양 세포에서 γENaC 경로 복원을 모델링하는 데 유용한 도구입니다.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.