βPAK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422108

Panoramica

Pak3 codifica βPAK (p21-activated kinase 3), una chinasi serina/treonina attivata a valle delle GTPasi della famiglia Rho RAC1 e CDC42. βPAK coordina il rimodellamento del citoscheletro di actina, la crescita dei neuriti e la segnalazione sinaptica attraverso vie che intersecano la segnalazione MAPK/ERK, la dinamica dell’adesione cellulare e la plasticità neuronale dipendente dall’attività. Nel topo, la funzione di Pak3 è particolarmente rilevante per gli studi sullo sviluppo del sistema nervoso e sul funzionamento dei circuiti, in cui alterazioni della segnalazione PAK possono influire sulla morfologia delle spine dendritiche e sulla connettività sinaptica. La disregolazione della segnalazione della famiglia PAK è stata collegata a fenotipi neuroevolutivi e cognitivi, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sulla segnalazione neuronale e sul controllo del citoscheletro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO βPAK (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pak3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pak3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pak3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina βPAK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pak3 per lo studio della segnalazione di βPAK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pak3 critici per la funzione di βPAK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pak3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal βPAK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal βPAK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pak3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal βPAK Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR βPAK (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pak3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pak3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.