Plásmido CRISPR de Activación (h) β Enolase: sc-400843-ACT

ENO3 codifica la β-enolasa humana, una enzima glucolítica enriquecida en músculo que cataliza la interconversión de 2-fosfoglicerato y fosfoenolpiruvato, contribuyendo a la producción de ATP durante una alta demanda metabólica. Como parte del metabolismo central del carbono, la β-enolasa conecta la glucólisis con una homeostasis energética más amplia y puede influir en el equilibrio redox celular a través del uso posterior del piruvato. La alteración de la expresión de ENO3 y del flujo glucolítico se ha investigado en contextos de disfunción del músculo esquelético, remodelación metabólica y cambios asociados a enfermedades hacia la glucólisis aeróbica. Por ello, ENO3 es un marcador y modulador útil para estudios que vinculan el metabolismo energético con las respuestas al estrés celular y los estados de diferenciación.

β Enolase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ENO3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

β Enolase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ENO3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ENO3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de β Enolase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ENO3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de β Enolase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía β Enolase en células tumorales con expresión de ENO3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.