Plasmide CRISPR/Cas9 KO β-casein (m): sc-419848

Présentation

Csn2 code la β‑caséine murine, une phosphoprotéine majeure sécrétée par les cellules épithéliales mammaires, qui contribue à l’assemblage des micelles de caséine ainsi qu’au transport calcium–phosphate dans le lait. Son expression est étroitement régulée pendant la gestation et la lactation par la prolactine et la signalisation des glucocorticoïdes, notamment via JAK2/STAT5 et des programmes transcriptionnels coopératifs qui coordonnent la différenciation de la glande mammaire et sa fonction sécrétoire. Comme la β‑caséine est un marqueur canonique de la différenciation lactogène, la perturbation de Csn2 est largement utilisée pour étudier le contrôle endocrinien de la maturation épithéliale, de la sécrétion protéique et de l’homéostasie du calcium. Les altérations de la régulation des gènes de caséine sont également informatives pour modéliser des états développementaux mammaires dérégulés et pour évaluer comment des signaux hormonaux et inflammatoires remodèlent le transcriptome des protéines du lait.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO β-casein (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Csn2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Csn2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Csn2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine β-casein.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Csn2 pour l'étude de la signalisation de β-casein, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Csn2 essentiels à la fonction de β-casein
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Csn2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le β-casein plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le β-casein plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Csn2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le β-casein plasmide HDR (m) et le β-casein (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Csn2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Csn2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.