β-1,4-GalNAc-T3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-415306-ACT

B4GALNT3 kodiert die humane β-1,4-GalNAc-T3, eine im Golgi-Apparat lokalisierte Glykosyltransferase, die N‑Acetylgalactosamin in β1,4‑Bindung überträgt und dadurch spezifische terminale Glykaneptitope auf Glykoproteinen und Glykolipiden erzeugt. Durch die Prägung von Glykosylierungsmustern an der Zelloberfläche und in sezernierten Proteinen beeinflusst β-1,4-GalNAc-T3 den Proteintransport, Rezeptor‑Ligand‑Interaktionen sowie lektinvermittelte Signalwege, die Zelladhäsion und Zellkommunikation steuern. Eine veränderte Expression oder Aktivität von B4GALNT3 wurde mit der fehlregulierten Glykan-Remodellierung in der Krebsbiologie und weiteren Zuständen in Verbindung gebracht, bei denen aberrante Glykosylierung Proliferation, Invasion und Immunerkennung moduliert. Dieses Gen ist daher relevant für Studien zu glykosylierungsabhängigen Signalwegen, zur Zusammensetzung der Glykokalyx und zu Mechanismen, die Golgi-Enzymprogramme mit Krankheitsphänotypen verknüpfen.

β-1,4-GalNAc-T3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen B4GALNT3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

β-1,4-GalNAc-T3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des B4GALNT3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der B4GALNT3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen β-1,4-GalNAc-T3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native B4GALNT3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von β-1,4-GalNAc-T3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des β-1,4-GalNAc-T3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem B4GALNT3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.