β-1,4-Gal-T4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407251

Übersicht

B4GALT4 kodiert für β-1,4-Gal-T4, eine im Golgi-Apparat lokalisierte β-1,4-Galactosyltransferase, die Galactose auf N‑Acetylglucosamin überträgt, um Typ‑II‑Lactosamin‑Einheiten auf N‑ und O‑gebundenen Glykanen sowie Glykolipiden aufzubauen. Über ihren Beitrag zur Glykosylierung beeinflusst β-1,4-Gal-T4 die Proteinfaltung, den intrazellulären Transport, die Verweildauer von Rezeptoren sowie durch glykanbindende Proteine vermittelte Zell‑Zell‑ bzw. Zell‑Matrix‑Interaktionen. Veränderte Galactosylierung und Lactosamin‑Verlängerung können Signalnetzwerke und die Immunerkennung umgestalten und verbinden ein B4GALT4‑abhängiges Glykan‑Remodeling mit krankheitsrelevanten Prozessen wie Entzündung und dem Verhalten von Tumorzellen. Als Teil des übergeordneten Glycosyltransferase‑Netzwerks trägt B4GALT4 dazu bei, die Zusammensetzung des Zelloberflächen‑Glykoms zu definieren, was Adhäsions‑, Migrations‑ und Differenzierungsprogramme beeinflusst.

Das β-1,4-Gal-T4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des B4GALT4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des B4GALT4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von B4GALT4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die β-1,4-Gal-T4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von B4GALT4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der β-1,4-Gal-T4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf B4GALT4-Exone abzielen, die für die β-1,4-Gal-T4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere B4GALT4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom β-1,4-Gal-T4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom β-1,4-Gal-T4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des B4GALT4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das β-1,4-Gal-T4 HDR-Plasmid (h) und β-1,4-Gal-T4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von B4GALT4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten B4GALT4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.