Plásmido CRISPR de Activación (h) β-1,3-Gal-T5: sc-409777-ACT

B3GALT5 codifica la β-1,3-Gal-T5, una β1,3-galactosiltransferasa residente en el aparato de Golgi que contribuye a la síntesis y elongación de glicolípidos y glicoproteínas al añadir galactosa mediante un enlace β1,3 a aceptores que contienen N-acetilglucosamina. A través de su papel en la glicosilación, la β-1,3-Gal-T5 influye en la composición de los glicanos de la superficie celular, que regula el tráfico de proteínas, la organización de receptores y las interacciones célula–célula mediadas por lectinas. La alteración de la actividad de B3GALT5 puede modificar programas de señalización y adhesión dependientes de glicanos implicados en el reconocimiento inmunitario, la diferenciación epitelial y los fenotipos de glicosilación asociados a tumores. En consecuencia, B3GALT5 es una diana útil para dilucidar cómo las redes de glicosiltransferasas regulan la biología de membranas y los cambios relevantes para la enfermedad en el comportamiento celular.

β-1,3-Gal-T5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de B3GALT5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

β-1,3-Gal-T5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus B3GALT5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional B3GALT5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de β-1,3-Gal-T5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo B3GALT5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de β-1,3-Gal-T5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía β-1,3-Gal-T5 en células tumorales con expresión de B3GALT5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.