Plasmide CRISPR d'Activation (h) α_2B-AR: sc-403430-ACT

ADRA2B code pour le récepteur humain α2B-AR, un récepteur adrénergique alpha-2 couplé aux protéines G (RCPG) qui s’associe préférentiellement à Gi/o afin d’inhiber l’adénylate cyclase, de réduire l’AMPc intracellulaire et de moduler la signalisation en aval dépendante de la PKA. L’activation du récepteur mobilise également des processus liés à la β-arrestine, l’internalisation et la désensibilisation du récepteur, et peut influencer l’activité de la voie MAPK/ERK de manière dépendante du contexte. Le récepteur α2B-AR contribue à la régulation de la libération de neurotransmetteurs, du tonus du muscle lisse vasculaire et des réponses du système nerveux sympathique via la détection des catécholamines. Une signalisation adrénergique dérégulée impliquant ADRA2B a été associée à des phénotypes pertinents pour la recherche cardiovasculaire et neurocomportementale, ce qui soutient son étude dans des modèles de réactivité au stress, de régulation autonome et de biais de signalisation des récepteurs.

α2B-AR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADRA2B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

α2B-AR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADRA2B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADRA2B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de α2B-AR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADRA2B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de α2B-AR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie α2B-AR dans les cellules tumorales présentant une expression de ADRA2B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.