Plasmide CRISPR d'Activation (h) α_2A-AR: sc-401545-ACT

ADRA2A code le récepteur adrénergique humain α2A-AR, un récepteur couplé aux protéines Gi/o qui module l’excitabilité cellulaire et la sécrétion en inhibant l’adénylate cyclase, en réduisant la signalisation cAMP/PKA et en régulant l’activité des canaux ioniques. L’activation du récepteur influence également les voies MAPK/ERK et celles liées à la β-arrestine, façonnant la libération de neurotransmetteurs et la transmission synaptique dans les systèmes nerveux central et périphérique. Outre ses rôles dans la régulation neuroendocrinienne et autonome, la signalisation d’ADRA2A affecte les processus métaboliques et vasculaires via le contrôle de circuits sensibles aux catécholamines. Une dérégulation de la signalisation des récepteurs adrénergiques a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques et à des traits cardiométaboliques, ce qui en fait une cible mécanistique pertinente en pharmacologie des récepteurs et dans les études de transduction du signal.

α2A-AR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADRA2A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

α2A-AR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADRA2A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADRA2A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de α2A-AR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADRA2A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de α2A-AR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie α2A-AR dans les cellules tumorales présentant une expression de ADRA2A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.