α-actinin-4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-400548-KO-2

Descripción general

ACTN4 codifica la α-actinina-4, una proteína de entrecruzamiento de filamentos de actina insensible al calcio que se localiza en adhesiones focales, fibras de estrés y uniones célula–célula para regular la arquitectura del citoesqueleto y la señalización mecánica. Al organizar redes de F-actina y conectarlas con complejos asociados a integrinas, la α-actinina-4 contribuye a la adhesión celular, el extendido, la migración y los cambios en la rigidez celular que influyen en vías como la señalización de las GTPasas Rho y la mecanotransducción. Además de sus funciones citoplasmáticas, se ha implicado a la α-actinina-4 en funciones nucleares, incluida la modulación de programas transcripcionales mediante interacciones proteína–proteína. La expresión alterada o las mutaciones de ACTN4 se han asociado con disfunción de los podocitos renales (incluida la glomeruloesclerosis focal y segmentaria) y con fenotipos invasivos en múltiples tipos de tumores, lo que respalda su relevancia para estudios del control del citoesqueleto y del comportamiento celular ligado a enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO α-actinin-4 (h2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ACTN4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ACTN4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ACTN4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína α-actinin-4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ACTN4 para la investigación de la señalización de α-actinin-4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ACTN4 críticos para la función de α-actinin-4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ACTN4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido α-actinin-4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido α-actinin-4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ACTN4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR α-actinin-4 (h) y el plásmido HDR α-actinin-4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ACTN4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ACTN4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.