α-actinin-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h2): sc-400548-KO-2

概要

ACTN4 は、カルシウム非感受性のアクチンフィラメント架橋タンパク質である α-アクチニン-4 をコードしており、細胞骨格の構築と機械的シグナル伝達を制御するために、フォーカルアドヒージョン、ストレスファイバー、および細胞間接着部位に局在します。α-アクチニン-4 は、F-アクチンネットワークを組織化し、それらをインテグリン関連複合体に連結することで、細胞接着、伸展、遊走に寄与するとともに、Rho GTPase シグナル伝達やメカノトランスダクションなどの経路に影響を与える細胞の硬さの変化にも関与します。さらに、細胞質での役割に加えて、α-アクチニン-4 はタンパク質間相互作用を介した転写プログラムの調節など、核内機能にも関与することが示唆されています。ACTN4 の発現異常または変異は、腎臓のポドサイト機能障害（巣状分節性糸球体硬化症を含む）や、複数の腫瘍タイプにおける浸潤性表現型と関連しており、細胞骨格制御および疾患に結び付く細胞挙動の研究における重要性を裏付けています。

α-actinin-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）は、human細胞株におけるACTN4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ACTN4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ACTN4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、α-actinin-4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、α-actinin-4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ACTN4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• α-actinin-4の機能に不可欠なACTN4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ACTN4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• α-actinin-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびα-actinin-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ACTN4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  α-actinin-4 HDRプラスミド（h）および α-actinin-4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはACTN4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のACTN4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。