ZO-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401395

概要

TJP2はタイトジャンクションの足場タンパク質ZO-2をコードしており、MAGUKファミリーに属します。ZO-2はクラウディンやオクルディンを皮質アクチン細胞骨格へ連結し、上皮および内皮バリアの完全性を支えます。またZO-2は、Rho GTPaseダイナミクスに影響する相互作用や、ジャンクション関連の転写プログラムなどを介して、極性や増殖を制御するシグナル伝達経路とジャンクション形成を協調させます。傍細胞透過性の制御と頂端‐基底方向の組織化の維持における役割を通じて、TJP2/ZO-2機能の変化はバリア機能障害や組織恒常性に関する研究で重要な対象となります。ZO-2のようなタイトジャンクション構成因子の制御異常は、ジャンクションのリモデリングや極性喪失が顕著な炎症、線維化、上皮の形質転換といった文脈でしばしば検討されます。

ZO-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTJP2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TJP2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TJP2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ZO-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ZO-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TJP2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ZO-2の機能に不可欠なTJP2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TJP2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ZO-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびZO-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TJP2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ZO-2 HDRプラスミド（h）および ZO-2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTJP2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTJP2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。