ZnT-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403094-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ZnT-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ZnT-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und ZnT-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC30A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ZnT-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403094-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZnT-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403094-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC30A1 kodiert den menschlichen Zinktransporter ZnT-1, einen Efflux-Carrier in der Plasmamembran, der die Anreicherung von Zn2+ im Zytosol begrenzt und zur Aufrechterhaltung der Metallionen-Homöostase beiträgt. Indem ZnT-1 den Zinkexport mit zellulären Stressantworten koppelt, beeinflusst er das Redoxgleichgewicht, metallresponsive Transkriptionsprogramme und den Schutz vor zinkinduzierter Zytotoxizität. Eine veränderte SLC30A1-Aktivität wurde mit gestörter Zinksignalgebung in Verbindung gebracht, die die neuronale Erregbarkeit, die Funktion epithelialer Barrieren und die Aktivierung von Immunzellen beeinträchtigen kann. Eine Fehlregulation von Zinktransportwegen wird mit Neurodegeneration, metabolischer Dysfunktion und entzündlichen Phänotypen assoziiert, wodurch SLC30A1 einen nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur metallabhängigen Biologie darstellt.
ZnT-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC30A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC30A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC30A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC30A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.