ZNF71 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410081-ACT

ZNF71 kodiert ein C2H2-Zinkfingerprotein mit KRAB-Domäne, das an der sequenzspezifischen Transkriptionsregulation und der epigenetischen Kontrolle der Genexpression beteiligt ist. Als mutmaßlicher Transkriptionsrepressor dürfte ZNF71 mit der KRAB/KAP1 (TRIM28)-assoziierten Chromatin-Remodelling-Maschinerie interagieren und dadurch die Heterochromatinbildung sowie Transkriptions-Silencing-Programme beeinflussen, die Zellidentität und stressresponsive Transkriptionszustände prägen. Eine veränderte Regulation von Zinkfinger-Transkriptionsfaktoren ist häufig mit gestörter Differenzierung, genomischer Stabilität und onkogenen Transkriptionsnetzwerken verknüpft, was ZNF71 für Studien zur Genregulationsschaltkreisen relevant macht. In humanen Systemen unterstützt die Untersuchung der ZNF71-Expression und nachgelagerter Transkriptionseffekte mechanistische Arbeiten zur chromatinabhängigen Modulation von Signalwegen und zu krankheitsassoziierten Transkriptionssignaturen.

ZNF71 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZNF71-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZNF71 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZNF71-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZNF71-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZNF71-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZNF71-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZNF71-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZNF71-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZNF71-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.