Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZNF462: sc-412915-ACT

ZNF462 code un facteur de transcription à doigts de zinc impliqué dans la régulation, dépendante de la chromatine, de l’expression génique au cours du développement et de la spécification du destin cellulaire. On pense qu’il module les programmes transcriptionnels en coordonnant une liaison à l’ADN spécifique de séquence avec des mécanismes de contrôle épigénétique qui influencent l’engagement de lignée, la prolifération et la différenciation. Une perturbation ou une altération du dosage de ZNF462 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des anomalies craniofaciales, ce qui étaye un rôle dans les réseaux de régulation génique du développement. Dans des systèmes expérimentaux, ZNF462 est étudié pour son impact sur le contrôle transcriptionnel, l’organisation de la chromatine et les voies en aval gouvernant la différenciation neuronale et mésenchymateuse.

ZNF462 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZNF462 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZNF462 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZNF462 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZNF462, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZNF462. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZNF462 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZNF462 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZNF462 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZNF462 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.