Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZKSCAN3: sc-416370-ACT

ZKSCAN3 (zinc finger avec domaines KRAB et SCAN 3) est un facteur de transcription nucléaire se liant à l’ADN, qui intègre des interactions protéiques médiées par SCAN à une régulation transcriptionnelle dépendante de KRAB. Il module des programmes d’expression génique liés à la prolifération cellulaire, à la différenciation et aux réponses au stress cellulaire, et a été impliqué dans la régulation de voies associées à l’autophagie et aux lysosomes. Une activité altérée de ZKSCAN3 a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques, notamment dans des cancers où des réseaux transcriptionnels dérégulés contribuent à la croissance invasive et à l’adaptation métabolique. En tant que nœud du contrôle transcriptionnel, ZKSCAN3 constitue une cible utile pour disséquer les signaux en amont et les signatures géniques en aval, pertinents pour la biologie oncogénique et la réponse au stress.

ZKSCAN3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZKSCAN3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZKSCAN3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZKSCAN3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZKSCAN3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZKSCAN3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZKSCAN3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZKSCAN3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZKSCAN3 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZKSCAN3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.