Zic2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404720

概要

ZIC2は、亜鉛フィンガー型転写因子Zic2をコードしており、胚のパターン形成および神経発生の主要な制御因子として、細胞運命の決定、増殖、分化を司る遺伝子発現プログラムを調節します。Zic2は発生期の転写ネットワークの中で機能し、神経管形成や前脳正中線のパターン形成に影響する経路を含む、形態形成を形作るシグナル伝達経路とも交差します。ZIC2活性の変化は先天性の神経発達障害、特に全前脳胞症と関連しており、腫瘍生物学や系譜可塑性に関する研究でも発現異常が報告されています。DNA結合性の転写調節因子として、Zic2は、ヒト細胞におけるエンハンサー—プロモーター制御、クロマチン依存的転写、発生関連の遺伝子制御回路を検討するための機構的な入口を提供します。

Zic2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるZIC2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ZIC2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ZIC2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Zic2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Zic2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ZIC2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Zic2の機能に不可欠なZIC2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ZIC2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Zic2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびZic2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ZIC2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Zic2 HDRプラスミド（h）および Zic2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはZIC2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のZIC2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。