Plásmido CRISPR de Activación (h) Zic2: sc-404720-ACT

ZIC2 codifica el factor de transcripción de dedos de zinc Zic2, un regulador clave del patrón temprano del embrión y de programas génicos del neurodesarrollo. Zic2 se une a elementos cis reguladores para controlar redes transcripcionales implicadas en la formación del tubo neural, la especificación del prosencéfalo y la determinación del destino celular, en intersección con vías que moldean las respuestas a morfógenos y las transiciones del estado de la cromatina. La desregulación de la expresión o la función de ZIC2 se ha asociado con trastornos del desarrollo, incluida la holoprosencefalia, y se han descrito circuitos transcripcionales alterados que involucran a ZIC2 en múltiples contextos de cáncer. Como regulador de unión al ADN, Zic2 constituye un punto accesible para explorar redes de regulación génica, especificación de linaje y fenotipos impulsados por factores de transcripción en modelos celulares humanos.

Zic2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZIC2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Zic2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZIC2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZIC2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Zic2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZIC2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Zic2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Zic2 en células tumorales con expresión de ZIC2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.