Partículas Lentivirales de Activación (m) ZFHX4: sc-429838-LAC

Zfhx4 codifica ZFHX4, un gran factor de transcripción homeobox con múltiples dedos de zinc que regula programas de expresión génica vinculados a la diferenciación neuronal, la guía axonal y el mantenimiento de la identidad celular. Al unirse al ADN y coordinar redes transcripcionales, ZFHX4 puede influir en procesos reguladores asociados a la cromatina y en vías de señalización del desarrollo que modelan el compromiso de linaje. Se han descrito alteraciones en la expresión de ZFHX4 en estudios de fenotipos del neurodesarrollo y en perfiles moleculares de varios contextos tumorales, lo que lo convierte en una diana útil para investigar el control transcripcional en modelos relevantes para enfermedades. En sistemas murinos, Zfhx4 se estudia habitualmente por sus contribuciones al desarrollo neural y por cómo los programas impulsados por factores de transcripción se intersectan con estados de proliferación y diferenciación.

Las partículas de activación lentiviral ZFHX4 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Zfhx4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ZFHX4 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Zfhx4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ZFHX4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Zfhx4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.