ZAR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406501

概要

ZAR1（zygote arrest 1）はRNA結合タンパク質をコードしており、初期胚発生における役割が最もよく知られています。具体的には、卵母細胞から接合子への移行を支え、母性mRNAの転写後制御に関与します。ヒト細胞では、ZAR1はmRNAの安定性や翻訳の制御、ならびに細胞質リボ核タンパク質（RNP）顆粒の動態調節と関連づけられており、これらの過程は細胞周期の進行や発生能（発生の成立しやすさ）に影響します。母性効果因子や生殖細胞系列関連のRNA制御因子の発現変化・制御異常は、モデル系において不妊表現型や発生不全と関連することが示されているため、ZAR1は生殖生物学および初期発生経路の研究において重要な対象となります。さらに、母性由来で豊富な因子であるZAR1は、RNA制御ネットワークがストレス応答や分化プログラムとどのように交差するかを検討するうえでも、解析しやすいポイントを提供します。

ZAR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるZAR1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ZAR1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ZAR1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ZAR1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ZAR1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ZAR1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ZAR1の機能に不可欠なZAR1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ZAR1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ZAR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびZAR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ZAR1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ZAR1 HDRプラスミド（h）および ZAR1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはZAR1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のZAR1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。