Zap-70 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400826

Visão geral

ZAP70 codifica a Zap-70, uma tirosina quinase citoplasmática essencial para a sinalização proximal do receptor de células T (TCR) a jusante da fosforilação das cadeias CD3/ζ pela LCK. Após ser recrutada para ITAMs fosforilados, a Zap-70 fosforila proteínas adaptadoras como LAT e SLP-76, coordenando a montagem de complexos de sinalização que propagam a ativação da PLCγ1, o fluxo de Ca²⁺, cascatas de MAPK, programas transcricionais de NF-κB/NFAT e a remodelação do citoesqueleto. Essas vias controlam a seleção de timócitos, a ativação e diferenciação de células T e suas funções efetoras, conectando a atividade de ZAP70 à homeostase imune. Alterações na expressão de ZAP70 ou na dinâmica de sua sinalização têm sido associadas a fenótipos de imunodeficiência e à ativação linfocitária desregulada observada em contextos de doenças autoimunes e hematológicas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Zap-70 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ZAP70 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ZAP70, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ZAP70 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Zap-70.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ZAP70 para a investigação da sinalização de Zap-70, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ZAP70 críticos para a função Zap-70
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ZAP70 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Zap-70 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Zap-70 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ZAP70. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Zap-70 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Zap-70 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ZAP70 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ZAP70 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.