Plasmide Double Nickase (m) XRCC1: sc-423738-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) XRCC1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide XRCC1 Double Nickase (m) et le plasmide XRCC1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Xrcc1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) XRCC1 | sc-423738-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Xrcc1** code **XRCC1**, une protéine d’échafaudage qui coordonne la réparation par excision de base et la réparation des cassures simple brin en recrutant, sur les sites de lésions, des facteurs tels que la ligase III de l’ADN, POLβ et PARP1. XRCC1 contribue au maintien du génome pendant la réplication et la transcription en favorisant le traitement rapide et la refermeture des interruptions des brins d’ADN, limitant ainsi les aberrations chromosomiques et le stress réplicatif. La perturbation des mécanismes de réparation dépendants d’XRCC1 augmente la signalisation des dommages à l’ADN et peut sensibiliser les cellules aux lésions oxydatives endogènes et aux agressions génotoxiques, reliant cette voie à des mécanismes de mutagenèse et d’instabilité génomique pertinents pour des phénotypes associés aux maladies dans divers tissus.
XRCC1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Xrcc1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Xrcc1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Xrcc1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Xrcc1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.