Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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XPF Double Nickase Plasmid (h): sc-401692-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das XPF Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- XPF Double-Nickase-Plasmid (h) und XPF Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ERCC4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: XPF: sc-398032
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
XPF Double Nickase Plasmid (h) | sc-401692-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
XPF Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401692-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERCC4 kodiert die strukturspezifische Endonuklease XPF, die mit ERCC1 ein Heterodimer bildet und 5′-Schnitte an DNA-Läsionen sowie an verzweigten DNA-Zwischenprodukten katalysiert. Dieser Komplex ist für die Nukleotid-Exzisionsreparatur (NER) sperriger Addukte essenziell, beteiligt sich im Rahmen des Fanconi-Anämie-Netzwerks an der Reparatur von Interstrang-Quervernetzungen und trägt zur Verarbeitung blockierter Replikationsgabeln bei. Die XPF-Aktivität unterstützt die Aufrechterhaltung der Genomstabilität, indem sie Läsionserkennung, Inzision und nachfolgende Reparatursyntheseschritte koordiniert. Defekte der ERCC4-Funktion sind mit beeinträchtigten DNA-Schadensantworten verknüpft und gehen mit UV-Empfindlichkeit sowie Phänotypen genomischer Instabilität einher, die für die Krebsbiologie und erbliche DNA-Reparaturerkrankungen relevant sind.
XPF Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ERCC4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ERCC4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ERCC4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ERCC4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.