XBP1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400131-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das XBP1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- XBP1 Double-Nickase-Plasmid (h) und XBP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf XBP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: XBP1: sc-8015
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
XBP1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400131-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
XBP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400131-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
XBP1 (X-box binding protein 1) ist ein basischer Transkriptionsfaktor mit Leucinzipper-Domäne, der als zentraler Effektor der UPR (Unfolded Protein Response) fungiert, insbesondere nachgeschaltet der ER-Stress-Signalübertragung über die IRE1-vermittelte, unkonventionelle Spleißung. Die gespleißte XBP1-Isoform treibt Transkriptionsprogramme an, die die Kapazität des ER erweitern, Proteinfaltung und -sekretion fördern und die Proteostase mit dem Lipidstoffwechsel sowie der zellulären Differenzierung koordinieren. Die XBP1-Aktivität ist eng mit der Funktion sekretorischer Zellen in Immun- und endokrinen Zelllinien verknüpft und beeinflusst entzündliche Signalwege sowie die metabolische Anpassung unter Stress. Eine Fehlregulation XBP1-abhängiger Signalwege wurde mit Erkrankungen in Verbindung gebracht, die mit chronischem ER-Stress einhergehen, darunter Aspekte der Krebsbiologie, Mechanismen metabolischer Erkrankungen und immunvermittelte Störungen, was XBP1 zu einem häufig genutzten Knotenpunkt für die Untersuchung von Stressanpassungs-Schaltkreisen macht.
XBP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des XBP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von XBP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die XBP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit XBP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.