XBP1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423727-ACT

マウスXbp1は転写因子XBP1をコードしており、XBP1は小胞体ストレス時にIRE1αによるmRNAスプライシングの下流で活性化されるアンフォールドタンパク質応答（UPR）の中枢的制御因子です。XBP1は、小胞体のタンパク質折りたたみ能を拡張する転写プログラムを制御し、ER関連分解（ERAD）を促進するとともに、分泌細胞の分化や形質細胞における免疫グロブリン産生を支えます。プロテオスタシス、脂質代謝、炎症シグナルとの統合を通じて、XBP1は代謝ストレスおよび免疫活性化に対する細胞の適応に影響を与えます。XBP1シグナルの破綻は、炎症、神経変性、糖尿病、がん生物学のモデルで研究されている病的なERストレス状態と関連していることが示されています。

XBP1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Xbp1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

XBP1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Xbp1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はXbp1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性XBP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のXbp1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるXBP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびXbp1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるXBP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。