Partículas Lentivirales de Activación (m) WTAP: sc-425635-LAC

El gen **Wtap** de ratón codifica **WTAP**, un componente regulador central del complejo metiltransferasa de ARN **m6A** que coopera con **METTL3/METTL14** para controlar el depósito de **N6-metiladenosina** en **ARNm** y **ARNlnc**. WTAP ayuda a coordinar el procesamiento co-transcripcional del ARN, incluido el empalme alternativo, la estabilidad del ARNm, la exportación nuclear y la traducción, moldeando así la progresión del ciclo celular, los programas de diferenciación y las respuestas al estrés. A través de su papel en la regulación epitranscriptómica, WTAP influye en vías vinculadas al mantenimiento de células madre y a la especificación de linaje, y se ha asociado con fenotipos proliferativos y del desarrollo desregulados en modelos relevantes para enfermedad. La alteración de los patrones de m6A dependientes de WTAP puede remodelar la salida del transcriptoma y las redes de expresión proteica, lo que convierte a **Wtap** en un nodo útil para investigar el metabolismo del ARN y el control de la expresión génica.

Las partículas de activación lentiviral WTAP (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Wtap en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral WTAP (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Wtap, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de WTAP. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Wtap y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.