Plásmido Doble Nickase (h) Wolframin: sc-403869-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Wolframin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Wolframin (h) y el plásmido de doble nickasa Wolframin (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a WFS1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Wolframin | sc-403869-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Wolframin | sc-403869-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WFS1 codifica la wolframina, una proteína de membrana del retículo endoplásmico (RE) con múltiples dominios transmembrana que contribuye a mantener la homeostasis del RE y protege a las células frente a señales desadaptativas de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) durante el estrés secretor y metabólico. La wolframina participa en procesos relacionados con el manejo de Ca²⁺ en el RE, la proteostasis y la comunicación entre las vías de estrés del RE y la función mitocondrial, influyendo en la supervivencia celular y en la capacidad de secreción de insulina. La desregulación de WFS1 se asocia con el síndrome de Wolfram y también se ha implicado en fenotipos más amplios de neurodegeneración y de alteraciones vinculadas a la diabetes, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar redes de señalización sensibles al estrés. En modelos de células humanas, la perturbación de WFS1 ofrece una lectura de marcadores de estrés del RE/UPR, de la señalización dependiente de calcio y de efectos posteriores sobre el metabolismo y el destino celular.
Wolframin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus WFS1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de WFS1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de WFS1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con WFS1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.