Wnt-8b CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405077-ACT

WNT8B kodiert das sezernierte Glykoprotein Wnt-8b, einen Liganden im Wnt-Signalnetzwerk, das die Festlegung von Zellschicksalen, Proliferation und Gewebemusterbildung reguliert. Wnt-8b beeinflusst vor allem kanonische Wnt/β-Catenin-abhängige Transkriptionsprogramme, indem es an Frizzled- und LRP-Korezeptoren bindet, mit nachgeschalteten Effekten auf die Entwicklungsgenexpression und Differenzierungsverläufe. In der menschlichen Biologie ist die WNT8B-Aktivität eng mit neuroentwicklungsbezogenen Prozessen und der regionalen Musterbildung im zentralen Nervensystem verknüpft; zudem wird ein veränderter „Ton“ des Wnt-Signalwegs häufig im Kontext onkogener Signalgebung und gestörter Wachstumskontrolle untersucht. Eine Modulation der WNT8B-Expression ist daher relevant, um das Cross-Talk innerhalb des Signalwegs zu analysieren, einschließlich TCF/LEF-vermittelter Transkription, stammzellähnlicher Zellzustände und kontextabhängiger Differenzierungsergebnisse.

Wnt-8b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen WNT8B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Wnt-8b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des WNT8B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der WNT8B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Wnt-8b-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native WNT8B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Wnt-8b-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Wnt-8b-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem WNT8B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.