Wnt-7a CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423721

概要

Wnt7a は分泌性リガンドである Wnt-7a をコードしており、Wnt シグナル伝達の主要な制御因子として、β-カテニン依存的な転写に加え、細胞骨格ダイナミクスや平面内細胞極性（PCP）を制御する非カノニカル経路の出力にも影響を及ぼします。マウス組織では、Wnt-7a は胚発生におけるパターニングおよび器官形成に関与し、Frizzled/LRP 受容体を介したシグナルによって、細胞運命の決定、増殖、遊走の協調に寄与します。Wnt7a 活性の変化は、発生プログラムの異常や組織恒常性の破綻といった文脈でしばしば研究されており、Wnt 経路のシグナル強度やフィードバックループが遺伝子発現状態を形作ります。広範な下流効果をもつ経路ノードとして、Wnt-7a は形態形成、幹／前駆細胞の挙動、組織構築のリモデリングにおける役割の解明のために一般的に解析されています。

Wnt-7a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるWnt7a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Wnt7a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Wnt7aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Wnt-7aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Wnt-7aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Wnt7a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Wnt-7aの機能に不可欠なWnt7aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Wnt7aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Wnt-7a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびWnt-7a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Wnt7a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Wnt-7a HDRプラスミド（m）および Wnt-7a HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWnt7aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWnt7a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。