Wnt-5b CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423719

概要

マウスのWnt5bは、分泌性糖タンパク質であるWnt-5bをコードしており、発生および組織恒常性の維持において、細胞極性、方向性移動、ならびに細胞骨格の再構築を制御する非カノニカルWntリガンドです。Wnt-5bは、平面内細胞極性（PCP）経路やWnt/Ca2+シグナル伝達など、β-カテニン非依存性の経路を主として介してシグナルを伝え、Frizzledに加えてRORファミリーの受容体型チロシンキナーゼなどの共受容体を介し、下流のJNK、PKC、小型GTPaseの活性を調節します。これらの経路は形態形成、神経パターニング、間質—上皮間コミュニケーションに影響し、WNT5Bの発現異常は、疾患関連の文脈において分化プログラムの変化や侵襲的な細胞挙動と関連づけられています。炎症シグナルや細胞外マトリックス（ECM）シグナルと交差する経路ノードとして、Wnt-5bは発生、代謝、腫瘍微小環境の生物学に関するモデルで頻繁に検討されています。

Wnt-5b CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるWnt5b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Wnt5b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Wnt5bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Wnt-5bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Wnt-5bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Wnt5b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Wnt-5bの機能に不可欠なWnt5bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Wnt5bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Wnt-5b CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびWnt-5b CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Wnt5b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Wnt-5b HDRプラスミド（m）および Wnt-5b HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWnt5bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWnt5b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。