Wnt-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423715

概要

Wnt3は、分泌性糖タンパク質リガンドであるWnt-3をコードしており、Frizzled受容体および共受容体LRP5/6に結合することでWntシグナル伝達を開始し、細胞運命の決定、増殖、組織パターニングを制御します。マウスでは、Wnt-3は初期胚発生および体軸形成におけるカノニカルなβ-カテニン/TCF依存性転写プログラムの主要な駆動因子であり、分化や形態形成過程に下流の影響を及ぼします。Wnt3活性の変化は発生シグナルネットワークを乱し、先天異常や腫瘍性のWnt/β-カテニンシグナルに関連する異常な経路出力に寄与し得ます。経路リガンドとしてのWnt-3は、幹細胞の維持や分化モデルにおいてBMP、FGF、Notch経路とのクロストークを研究する上でも重要です。

Wnt-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるWnt3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Wnt3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Wnt3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Wnt-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Wnt-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Wnt3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Wnt-3の機能に不可欠なWnt3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Wnt3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Wnt-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびWnt-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Wnt3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Wnt-3 HDRプラスミド（m）および Wnt-3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWnt3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWnt3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。