Wnt-2b CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423714

概要

Wnt2b は、分泌性糖タンパク質である Wnt-2b をコードしており、Wnt-2b は Frizzled/LRP 受容体複合体を活性化して、カノニカルな β-カテニンシグナル伝達、および状況によってはノンカノニカル Wnt 経路を調節するリガンドです。マウス組織において Wnt-2b は、細胞運命の決定、増殖制御、上皮–間葉相互作用、臓器形態形成に関与し、とりわけ眼および前脳の発生で重要な役割が報告されています。TCF/LEF 下流の転写プログラムを調節することで、Wnt-2b は幹細胞／前駆細胞の維持や組織パターニングに影響します。Wnt2b シグナルの制御異常は、発生異常の研究や、異常な増殖・分化に結びつく機構を含む Wnt 駆動性の病態生物学の解明において重要です。

Wnt-2b CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるWnt2b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Wnt2b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Wnt2bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Wnt-2bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Wnt-2bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Wnt2b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Wnt-2bの機能に不可欠なWnt2bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Wnt2bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Wnt-2b CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびWnt-2b CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Wnt2b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Wnt-2b HDRプラスミド（m）および Wnt-2b HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWnt2bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWnt2b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。