Wnt-10a CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403285-ACT

WNT10A codiert Wnt-10a, einen sezernierten Liganden der Wnt-Familie, der über den kanonischen β-Catenin/TCF-Signalweg sowie kontextabhängige nicht-kanonische Wnt-Wege die Festlegung von Zellschicksalen, Proliferation und Gewebemusterbildung reguliert. Die Aktivität von Wnt-10a beeinflusst epithel–mesenchymale Interaktionen und Differenzierungsprogramme und spielt eine wichtige Rolle bei der Entwicklung und Erhaltung ektodermaler Anhangsgebilde wie Haarfollikel und Zähne. Eine Fehlregulation der WNT10A-Signalgebung wurde mit angeborenen ektodermalen Dysplasien und odontogenen Defekten in Verbindung gebracht; zudem wird eine veränderte Expression auch bei Krebserkrankungen untersucht, bei denen Umbauten in Wnt-Signalwegen das Verhalten von Tumorzellen und die Reaktionen des Stromas beeinflussen. Als Knotenpunkt im Signalweg wird WNT10A häufig genutzt, um ligandspezifische Effekte von Wnt auf Transkriptionsnetzwerke, Morphogenese und die Dynamik von Stamm-/Vorläuferzellen zu untersuchen.

Wnt-10a Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen WNT10A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Wnt-10a Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des WNT10A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der WNT10A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Wnt-10a-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native WNT10A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Wnt-10a-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Wnt-10a-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem WNT10A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.