Plásmido CRISPR de Activación (m) WISP-1: sc-423705-ACT

Wisp1 codifica WISP-1 (proteína 1 de la vía de señalización inducible por WNT1), un factor matricelular secretado de la familia CCN que integra señales de la matriz extracelular con la señalización de factores de crecimiento y de Wnt. En tejidos de ratón, WISP-1 modula la adhesión, la migración, la proliferación y la supervivencia celular al influir en vías vinculadas a la actividad de β-catenina, la señalización mediada por integrinas y la remodelación del microambiente estromal. Su expresión se asocia comúnmente con programas fibrogénicos, la diferenciación osteogénica y condrogénica, y respuestas tipo reparación de heridas que modelan la arquitectura tisular. La desregulación de la señalización de WISP-1 se ha estudiado en contextos de fibrosis patológica, remodelación asociada a inflamación e interacciones tumor–estroma relevantes para la biología del cáncer y la investigación de metástasis.

WISP-1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Wisp1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

WISP-1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Wisp1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Wisp1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de WISP-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Wisp1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de WISP-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía WISP-1 en células tumorales con expresión de Wisp1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.