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Wee 1慢病毒激活颗粒(m) | sc-423702-LAC | 200 µl | $455.00 |
小鼠 Wee1(Wee 1)是一种保守的丝氨酸/苏氨酸激酶,通过抑制性磷酸化来限制 CDK1 活性,从而执行 G2/M 检查点,并将有丝分裂进入与 DNA 复制和修复的完成相协调。Wee1 通过整合 DNA 损伤应答信号,在 S 期和 G2 期帮助维持复制叉稳定性与基因组完整性,进而影响细胞周期时序、染色质动态以及细胞命运决定。Wee1 信号失调与基因组不稳定和癌症生物学模型中观察到的增殖调控异常及检查点适应有关;在复制应激与检查点功能状态共同塑造细胞表型的研究背景下,Wee1 也经常被用于相关研究。
Wee 1 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Wee1 表达。
Wee 1 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Wee1转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性Wee 1表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Wee1 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。