WDR96 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407276

概要

CFAP43は、ヒトのWDリピート含有タンパク質WDR96をコードしており、繊毛や鞭毛の構築を支えるタンパク質間相互作用に関与する、足場（スキャフォールド）タンパク質であると予測されています。WDリピートタンパク質は一般に、微小管を基盤とする構造を制御する多タンパク質複合体の形成を担っており、CFAP43は軸糸（アクソネーム）の組織化や運動性繊毛の機能に関わる過程と関連づけられています。繊毛関連成分の破綻は、細胞極性、流体の流れの感知、ならびに中心体／基底小体で統合される細胞内シグナル伝達経路に影響を及ぼし得ます。CFAP43の遺伝的変異は、精子鞭毛の異常や男性不妊の表現型と関連していることが報告されており、繊毛病（ciliopathy）および生殖生物学の研究において重要な対象です。

WDR96 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCFAP43遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CFAP43内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CFAP43のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、WDR96タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、WDR96シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CFAP43欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• WDR96の機能に不可欠なCFAP43エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CFAP43ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• WDR96 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびWDR96 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CFAP43遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  WDR96 HDRプラスミド（h）および WDR96 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCFAP43ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCFAP43標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。