WDR59 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405648

概要

WDR59（WD repeat domain 59）は、WD40リピートをもつ足場（スキャフォールド）タンパク質であり、mTORC1シグナル伝達の主要な上流制御因子であるGATOR2複合体の中核構成要素として機能します。WDR59はGATOR2を介して、リソソームにおけるmTORC1の活性化を制御するアミノ酸感知経路に寄与し、その結果、タンパク質合成、栄養応答性の成長プログラム、オートファジーに影響を与えます。WDR59依存的なシグナル伝達が乱れると、細胞代謝やストレス応答が再編成され得ますが、これらはがん生物学やmTOR活性の異常調節に関連する他の疾患でしばしば検討される過程です。そのため、WDR59は栄養状態と細胞増殖・恒常性を統合する役割の観点から、継続的に研究されています。

WDR59 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるWDR59遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、WDR59内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、WDR59のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、WDR59タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、WDR59シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、WDR59欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• WDR59の機能に不可欠なWDR59エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、WDR59ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• WDR59 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびWDR59 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、WDR59遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  WDR59 HDRプラスミド（h）および WDR59 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWDR59ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWDR59標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。