WDR22 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-435826

概要

Dcaf5 は WDR22 をコードしており、WDR22 は WD リピートを含むタンパク質として、DDB1–CUL4 型 E3 ユビキチンリガーゼの生物学に関与すると考えられています。この系では、WD リピート型アダプターが基質特異性の付与に寄与し、ユビキチン依存的なプロテオスタシス（タンパク質恒常性維持）を制御します。これらの複合体を介して、WDR22 は、細胞周期の進行、DNA 複製／修復に伴う品質管理、ならびにストレス応答性シグナル伝達を協調させる「調節されたタンパク質分解」に影響し得る位置にあります。ユビキチン化ダイナミクスの変化は、ゲノム不安定性や増殖制御の破綻という機構と広く関連するため、Dcaf5/WDR22 は、モデル系において腫瘍化（オンコジェニック・トランスフォーメーション）やその他の増殖性疾患に結び付く経路を研究するうえで有用な切り口となります。マウスでは、Dcaf5 を遺伝学的に改変することで、DCAF 関連ユビキチンリガーゼ・ネットワークの組織特異的／状況依存的な役割を明確化する助けになります。

WDR22 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDcaf5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Dcaf5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Dcaf5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、WDR22タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、WDR22シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Dcaf5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• WDR22の機能に不可欠なDcaf5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Dcaf5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• WDR22 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびWDR22 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Dcaf5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  WDR22 HDRプラスミド（m）および WDR22 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDcaf5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDcaf5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。