Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double Nickase Plasmid (m): sc-419607-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double-Nickase-Plasmid (m) und Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Cdkn1a abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Waf1/Cip1/CDKN1A p21: sc-6246
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419607-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419607-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Cdkn1a kodiert den cyclinabhängigen Kinaseinhibitor p21 (Waf1/Cip1), einen zentralen Effektor der DNA-Schadens- und Stressantwort, der die CDK-Aktivität hemmt und so die Zellzyklus-Checkpoints an den Übergängen G1/S und G2/M durchsetzt. p21 wird transkriptionell durch p53 reguliert und integriert Signale aus ATM/ATR-abhängigen Signalwegen, wodurch Zellzyklusarrest, DNA-Reparatur und kontextabhängige Seneszenzprogramme koordiniert werden. Durch die Modulation von Cyclin–CDK-Komplexen und die Interaktion mit PCNA beeinflusst p21 die Replikationsdynamik und die Genomstabilität. Eine fehlregulierte Cdkn1a/p21-Signalgebung ist an Tumorentstehung, Gewebealterung und entzündungsassoziiertem Remodeling beteiligt und stellt damit einen häufigen Knotenpunkt in Studien zur Proliferationskontrolle und Stressanpassung in Mausmodellen dar.
Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Cdkn1a-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Cdkn1a abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Cdkn1a-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Cdkn1a-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.