Plasmide Double Nickase (h) Waf1/Cip1/CDKN1A p21: sc-400013-NIC

CDKN1A code p21 (Waf1/Cip1), un inhibiteur des kinases dépendantes des cyclines qui intègre des signaux de stress afin de freiner la progression du cycle cellulaire au point de contrôle G1/S. Fortement induite par p53 en réponse aux dommages de l’ADN, p21 inhibe les complexes associés à CDK2 et CDK1 et module la réplication et la réparation de l’ADN dépendantes de PCNA. Par ces interactions, p21 influence la sénescence, l’arrêt transitoire du cycle cellulaire et les décisions de destinée cellulaire en contexte de stress génotoxique. Une dérégulation de la signalisation CDKN1A/p21 est fréquemment impliquée dans la transformation oncogénique et la perturbation des voies suppresseurs de tumeurs, et elle est également pertinente pour des processus tels que la tolérance au stress de réplication et les modèles de sénescence induite par les traitements.

Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDKN1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDKN1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDKN1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDKN1A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.