VPAC1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423678

Visão geral

Vipr1 codifica o VPAC1, um recetor acoplado à proteína G da classe B que se liga ao peptídeo intestinal vasoativo (VIP) e ao polipeptídeo ativador da adenilato ciclase hipofisária, acoplando-se predominantemente a Gs e elevando o cAMP intracelular. A sinalização via VPAC1 ativa programas de transcrição dependentes de PKA/CREB e pode cruzar-se com as vias MAPK e PI3K para regular a proliferação e diferenciação celulares, a função de barreira epitelial e as respostas de citocinas. Em tecidos de rato, o VPAC1 contribui para circuitos neuroendócrinos e imunorregulatórios, incluindo a modulação da sinalização inflamatória e da atividade do músculo liso/secretória. A desregulação do eixo VIP–VPAC1 tem sido implicada em modelos de doença inflamatória intestinal, inflamação das vias aéreas do tipo asma e sinalização do microambiente associado a tumores, sustentando estudos mecanísticos de processos imunitários e epiteliais mediados por GPCR.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO VPAC1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Vipr1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Vipr1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Vipr1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína VPAC1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Vipr1 para a investigação da sinalização de VPAC1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Vipr1 críticos para a função VPAC1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Vipr1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo VPAC1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo VPAC1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Vipr1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo VPAC1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR VPAC1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Vipr1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Vipr1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.