von Willebrand Factor/VWF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423690

概要

Vwfは、内皮細胞および巨核球で合成され、Weibel–Palade小体と血小板α顆粒に貯蔵される、大型の多量体性糖タンパク質であるフォン・ヴィレブランド因子（VWF）をコードします。VWFは、高いずり応力下で、露出した内皮下コラーゲンと血小板糖タンパク質Ib/IX/Vを架橋することで血小板の粘着と凝集を仲介し、さらに循環中で凝固第VIII因子を安定化させます。VWFの制御された分泌と多量体のプロセシングは、一次止血を協調して制御する内皮活性化、細胞外マトリックス相互作用、ならびに止血性プロテアーゼネットワークを統合します。VWF量、多量体分布、またはクリアランスの調節異常は、血栓・炎症バランスを乱し、血管損傷、炎症、内皮機能障害モデルに関連する出血性および血栓性の表現型と結びついています。

von Willebrand Factor/VWF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるVwf遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Vwf内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Vwfのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、von Willebrand Factor/VWFタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、von Willebrand Factor/VWFシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Vwf欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• von Willebrand Factor/VWFの機能に不可欠なVwfエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Vwfゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• von Willebrand Factor/VWF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびvon Willebrand Factor/VWF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Vwf遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  von Willebrand Factor/VWF HDRプラスミド（m）および von Willebrand Factor/VWF HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVwfホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVwf標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。