Plasmide CRISPR/Cas9 KO von Willebrand Factor/VWF (m): sc-423690

Présentation

Vwf code le facteur von Willebrand (VWF), une grande glycoprotéine multimérique synthétisée par les cellules endothéliales et les mégacaryocytes, et stockée dans les corps de Weibel–Palade et les granules α plaquettaires. Le VWF médie l’adhésion et l’agrégation plaquettaires sous fort cisaillement en reliant le collagène sous-endothélial exposé au complexe glycoprotéique plaquettaire Ib/IX/V, et il stabilise le facteur de coagulation VIII dans la circulation. Sa sécrétion régulée et le traitement de ses multimères intègrent l’activation endothéliale, les interactions avec la matrice extracellulaire et les réseaux de protéases hémostatiques qui coordonnent l’hémostase primaire. Une dérégulation de l’abondance du VWF, de la distribution de ses multimères ou de sa clairance perturbe l’équilibre thrombo-inflammatoire et est associée à des phénotypes hémorragiques et thrombotiques pertinents dans des modèles de lésion vasculaire, d’inflammation et de dysfonction endothéliale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO von Willebrand Factor/VWF (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Vwf dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Vwf, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Vwf à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine von Willebrand Factor/VWF.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Vwf pour l'étude de la signalisation de von Willebrand Factor/VWF, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Vwf essentiels à la fonction de von Willebrand Factor/VWF
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Vwf pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le von Willebrand Factor/VWF plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le von Willebrand Factor/VWF plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Vwf. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le von Willebrand Factor/VWF plasmide HDR (m) et le von Willebrand Factor/VWF (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Vwf pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Vwf définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.