VMP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405940

概要

VMP1（vacuole membrane protein 1）は、複数の膜リモデリングイベントに必須の膜貫通型タンパク質であり、とりわけオートファジーの開始と進行に重要です。オートファジー関連因子との相互作用を介してファゴフォア形成に関与し、オートファゴソーム生合成を支えるほか、脂質移送やオルガネラ恒常性を協調的に制御するER–オルガネラ接触部位のダイナミクスにも関与するとされています。オートファジー以外にも、VMP1は小胞輸送や細胞ストレス適応に寄与しており、プロテオスタシスやオルガネラのターンオーバーの異常が顕著な、がん、神経変性、炎症などの状況でしばしば破綻するプロセスと関連します。

VMP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるVMP1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、VMP1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、VMP1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VMP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VMP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、VMP1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VMP1の機能に不可欠なVMP1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、VMP1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VMP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびVMP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、VMP1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VMP1 HDRプラスミド（h）および VMP1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVMP1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVMP1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。