VMA21 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407112

概要

VMA21は、オルガネラの酸性化を駆動する中核因子である液胞型H⁺-ATPase（V-ATPase）のV0セクターの組み立てに必要な、小胞体（ER）膜のシャペロンをコードします。VMA21はV-ATPaseの適切な生合成と輸送を可能にすることで、リソソームおよびエンドソームのpH制御、オートファジーフラックス、受容体リサイクリング、ならびにERの品質管理に関連するより広範なプロテオスタシス経路を支えます。VMA21の機能が障害されると、酸性化に依存するプロセスと細胞恒常性が乱れ、ストレス応答や分解経路の機能不全との機序的なつながりが示されます。VMA21の病的変異は、過剰なオートファジーを伴うX連鎖性ミオパチーと関連することが報告されており、筋細胞の維持およびリソソーム–オートファジー経路の制御における重要性が示されています。

VMA21 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるVMA21遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、VMA21内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、VMA21のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VMA21タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VMA21シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、VMA21欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VMA21の機能に不可欠なVMA21エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、VMA21ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VMA21 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびVMA21 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、VMA21遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VMA21 HDRプラスミド（h）および VMA21 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVMA21ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVMA21標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。