VMA21 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407112
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- VMA21 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico VMA21, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
VMA21 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-407112 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
VMA21 codifica uma chaperona de membrana do retículo endoplasmático (RE) necessária para a montagem do setor V0 da H+-ATPase vacuolar (V-ATPase), um motor central da acidificação de organelos. Ao permitir a biogénese e o tráfego adequados da V-ATPase, a VMA21 sustenta o controlo do pH lisossomal e endossomal, o fluxo autofágico, a reciclagem de recetores e vias mais amplas de proteostase ligadas ao controlo de qualidade do RE. A disrupção de VMA21 perturba processos dependentes de acidificação e a homeostase celular, fornecendo uma ligação mecanística a respostas ao stress e à disfunção de vias degradativas. Variações patogénicas em VMA21 foram associadas à miopatia ligada ao X com autofagia excessiva, sublinhando a sua relevância para a manutenção das células musculares e para a regulação da via lisossoma–autofagia.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO VMA21 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene VMA21 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do VMA21, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do VMA21 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína VMA21.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de VMA21 para a investigação da sinalização de VMA21, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) VMA21 críticos para a função VMA21
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos VMA21 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo VMA21 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo VMA21 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus VMA21. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo VMA21 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR VMA21 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia VMA21 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo VMA21 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.