VIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423677

概要

Vip は血管作動性腸管ペプチド（VIP）をコードしており、VIP は主に GPCR である VIPR1 および VIPR2 を介してシグナルを伝達し、アデニル酸シクラーゼを刺激して cAMP を増加させ、PKA/CREB 依存的な転写プログラムを活性化します。マウスでは、VIP は神経内分泌コミュニケーション、視交叉上核における概日リズムの協調、ならびに末梢組織における平滑筋緊張の調節、血管拡張、分泌活性の制御に寄与します。VIP を介したシグナル伝達は免疫細胞の分極化やサイトカイン産生を調節し、この経路を炎症の恒常性および粘膜バリア機能と結び付けています。VIP/VIPR シグナルの異常は、神経炎症応答の変化、消化管運動や分泌の表現型、さらに疾患モデルにおける腫瘍関連免疫や神経内分泌形質への文脈依存的な影響と関連付けられています。

VIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるVip遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Vip内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Vipのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VIPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VIPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Vip欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VIPの機能に不可欠なVipエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Vipゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびVIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Vip遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VIP HDRプラスミド（m）および VIP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVipホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVip標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。