Plasmide CRISPR d'Activation (h) VILIP-1: sc-401100-ACT

VSNL1 code la protéine « visinin-like protein 1 » (VILIP-1), un capteur neuronal de calcium de la famille EF-hand, qui subit des changements conformationnels dépendants du Ca2+ afin de réguler la signalisation au niveau des membranes. VILIP-1 participe à la modulation, couplée au Ca2+, de l’activité synaptique et de l’excitabilité neuronale, en influençant les voies de seconds messagers et les programmes transcriptionnels en aval, importants pour la neuroplasticité. Des altérations de l’expression de VSNL1/VILIP-1 et de la dynamique de la signalisation calcique ont été associées à des processus pertinents pour les maladies neurodégénératives et neuropsychiatriques, notamment les réponses neuronales au stress et la dysfonction synaptique. En conséquence, VSNL1 est fréquemment étudié dans des modèles de différenciation neuronale, de signalisation dépendante de l’activité et de phénotypes moléculaires liés à des biomarqueurs.

VILIP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de VSNL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

VILIP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus VSNL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription VSNL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de VILIP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus VSNL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de VILIP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie VILIP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de VSNL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.