VEGF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (r): sc-437276

概要

血管内皮増殖因子（VEGF）は分泌性でヘパリン結合性のシグナルタンパク質であり、内皮細胞上のVEGFR2などの受容体型チロシンキナーゼを活性化することで、血管新生および血管透過性を促進します。VEGFシグナルはPI3K–AKT、MAPK/ERK、PLCγ–PKC経路を介して伝達され、内皮細胞の増殖、遊走、生存、ならびに一酸化窒素（NO）に連動した透過性応答を制御します。また、低酸素誘導因子（HIF）プログラムや細胞外マトリックスのリモデリングとも連携し、発生過程やストレス下における組織の血管化を協調的に制御します。VEGF活性の破綻は、病的血管新生、炎症に伴う浮腫、虚血関連リモデリング、腫瘍随伴性血管新生のモデルにおいて、機序的な指標（メカニスティック・リードアウト）として広く用いられています。

VEGF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r）は、rat細胞株における遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VEGFタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VEGFシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VEGFの機能に不可欠なエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VEGF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r）およびVEGF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r2）によってコードされるgRNAは、遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VEGF HDRプラスミド（r）および VEGF HDRプラスミド（r2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定の標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。