VE-cadherin Double Nickase Plasmid (m2): sc-419596-NIC-2
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das VE-cadherin Double Nickase Plasmid (m2) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- VE-cadherin Double-Nickase-Plasmid (m2) und VE-cadherin Double-Nickase-Plasmid (m22) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Cdh5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: VE-cadherin: sc-9989
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
VE-cadherin Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419596-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen Cdh5 kodiert VE-Cadherin, ein endothelialspezifisches Adhärenskontakt-Protein, das homophile Zell-Zell-Adhäsion vermittelt und so die Integrität der vaskulären Barriere und die Gefäßstabilität aufrechterhält. VE-Cadherin ist über Catenine mit dem Aktin-Zytoskelett verknüpft und koordiniert dadurch den Umbau von Zellkontakten während der Angiogenese und der endothelialen Polarisation; zudem ist es in die Signalwege von VEGF/VEGFR2 und Rho-Familien-GTPasen eingebunden, um Permeabilität und die Transmigration von Leukozyten zu regulieren. Eine dysregulierte Cdh5/VE-Cadherin-Funktion wird mit pathologischer Gefäßleckage, entzündungsassoziierter endothelialer Dysfunktion und aberranter Neovaskularisierung in Tumormikroumgebungen sowie bei Retinopathien in Verbindung gebracht. Die Geneditierung von Cdh5 in der Maus ermöglicht mechanistische Studien der Endothelbiologie, einschließlich der Dynamik von Zellkontakten, Angiogenese-Sprossungsassays und in vivo-Modellen der Gefäßentwicklung und der Störung der Barrierefunktion.
VE-cadherin Das Double-Nickase-Plasmid (m2) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Cdh5-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Cdh5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Cdh5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Cdh5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.